Kontaminatioun vun Zellkulturen kann einfach de meeschte gemeinsame Problem an Zellkulturlaboratoiren ginn, heiansdo ganz eeschte Konsequenzen.Zellkulturkontaminanten kënnen an zwou Kategorien opgedeelt ginn, chemesch Verunreiniger wéi Medium, Serum a Waasser Gëftstoffer, Endotoxine, Plastifizéierer a Botzmëttelen, a biologesch Verunreiniger wéi Bakterien, Schimmel, Hefen, Viren, Mykoplasma Kräiz Infektioun.Kontaminéiert duerch aner Zelllinnen.Och wann et onméiglech ass d'Kontaminatioun komplett z'eliminéieren, kënnen hir Frequenz an Gravitéit reduzéiert ginn andeems se hir Quell grëndlech verstoen a gutt aseptesch Techniken verfollegen
1.Dës Sektioun beschreift d'Haaptarte vu biologescher Kontaminatioun:
Bakteriell Kontaminatioun
Schimmel a Viruskontaminatioun
Mycoplasma Kontaminatioun
Hefekontaminatioun
1.1 Bakteriell Kontaminatioun
Bakterien sinn eng grouss Grupp vun ubiquitären Eenzelle Mikroorganismen.Si sinn normalerweis just e puer Mikron am Duerchmiesser a kënnen a verschiddene Formen kommen, vu Kugelen bis Staang a Spiralen.Wéinst hirer Ubiquity, Gréisst a séiere Wuesstumsrate sinn Bakterien, zesumme mat Hefen a Schimmel, déi heefegst biologesch Verunreiniger an der Zellkultur.
1.1.1 Detektioun vun bakteriell Kontaminatioun
Bakteriell Kontaminatioun gëtt einfach duerch visuell Inspektioun vun der Kultur bannent e puer Deeg no der infizéiert erkannt;
Infizéiert Kulturen erschéngen normalerweis bewölkt (dh, turbid), heiansdo mat engem dënnen Film op der Uewerfläch.
Plötzlech Drëpsen am pH vum Kulturmedium ginn och dacks begéint.
Ënnert engem Low-Power Mikroskop erschéngen d'Bakterien als kleng, bewegend Granulat tëscht den Zellen, an Observatioun ënner engem High-Power Mikroskop kann d'Forme vun eenzelne Bakterien opléisen.
1.2 Schimmel & Viruskontaminatioun
1.2.1 Schimmel Kontaminatioun
Schimmel sinn eukaryotesche Mikroorganismen vum Pilzräich, déi a Form vu multicelluläre Filamenter wuessen, genannt Hyphae.D'Verbindungsnetzwierker vun dëse multicelluläre Filamenter enthalen genetesch identesch Käre genannt Kolonien oder Myselium.
Ähnlech wéi Hefkontaminatioun, bleift de pH vun der Kultur stabil während der initialer Phas vun der Kontaminatioun an hëlt dann séier erop wéi d'Kultur méi schwéier infizéiert gëtt a bewölkt gëtt.Ënnert dem Mikroskop ass Myselium normalerweis filamentös, heiansdo als dichte Cluster vu Spore.D'Spore vu ville Schimmel kënnen an extrem haart an ongastfrëndlechen Ëmfeld während hirer dormanter Phase iwwerliewen a ginn nëmme aktivéiert wann déi richteg Wuesstumsbedingunge begéint sinn.
1.2.2 Viruskontaminatioun
Viren si mikroskopesch infektiiv Agenten déi d'Maschinnen vun der Gaaschtzelle fir d'Reproduktioun iwwerhuelen.Hir extrem kleng Gréisst mécht se schwéier an der Kultur z'entdecken an aus Reagenzen ze entfernen, déi an Zellkulturlaboratoiren benotzt ginn.Well déi meescht Viren ganz strikt Ufuerderunge fir hir Hosten hunn, beaflossen se normalerweis net negativ Zellkulture vun anere Arten wéi de Host.
Wéi och ëmmer, d'Benotzung vu virusinfizéierte Zellkulturen kann e seriéise Risiko fir d'Gesondheet vum Laboratoire ausmaachen, besonnesch wann mënschlech oder Primatzellen am Labo ugebaut ginn.
Viral Infektioun an Zellkulturen kann duerch Elektronenmikroskopie erkannt ginn, Immunostaining mat engem Set vun Antikörper, ELISA oder PCR mat passenden virale Primer.
1.3 Mycoplasma Kontaminatioun
Mycoplasmas sinn einfach Bakterien ouni Zellmaueren, a si ginn ugeholl datt si déi klengst selbstreplikéierend Organismen sinn.Wéinst hirer extrem klenger Gréisst (normalerweis manner wéi 1 Mikron), ass Mykoplasma schwéier z'entdecken, bis se extrem héich Dicht erreechen an d'Zellkulturen verschlechteren;Bis dohinner gëtt et normalerweis keng evident Zeeche vun enger Infektioun.
1.3.1 Detektioun vu Mykoplasma Kontaminatioun
E puer lues wuesse Mykoplasme kënnen a Kulturen bestoe bleiwen ouni Zell Doud ze verursaachen, awer si änneren d'Verhalen an de Metabolismus vun Hostzellen a Kulturen.
Chronesch Mykoplasma Infektioun kann duerch reduzéierter Zellproliferatiounsquote charakteriséiert ginn, reduzéierter Sättigungsdicht an Agglutinatioun an der Suspensiounskultur.
Wéi och ëmmer, deen eenzegen zouverléissege Wee fir d'Mykoplasma Kontaminatioun z'entdecken ass d'Kultur regelméisseg ze testen mat fluoreszenter Faarf (zB Hoechst 33258), ELISA, PCR, Immunstaining, Autoradiographie oder mikrobiellen Tester.
1.4 Hefekontaminatioun
Hefe sinn eenzel-celled Eukaryote vum Pilzkinnekräich, an der Gréisst vun e puer Mikron (normalerweis) bis 40 Mikron (selten).
1.4.1 Detektioun vun der Hefkontaminatioun
Wéi mat bakterieller Kontaminatioun, kënne Kulturen, déi mat Hef kontaminéiert sinn, bewölkt ginn, besonnesch wann d'Kontaminatioun an enger fortgeschratter Stadium ass.De pH vu Kulturen, déi mat Hefe kontaminéiert sinn, ännert sech ganz wéineg bis d'Kontaminatioun méi schwéier gëtt, a wéi enger Stuf de pH normalerweis eropgeet.Ënnert dem Mikroskop erschéngt Hef als individuell ovoid oder kugelfërmeg Partikel a ka méi kleng Partikel produzéieren.
2.Cross Infektioun
Och wann net sou heefeg wéi mikrobieller Kontaminatioun, extensiv Kräizkontaminatioun vu ville Zelllinnen mat HeLa an aner séier wuessend Zelllinnen ass e kloer definéierte Problem mat eeschte Konsequenzen.Kritt Zelllinne vu renomméierten Zellbanken, kontrolléiert regelméisseg d'Charakteristike vun den Zelllinnen a benotzt gutt aseptesch Techniken.Dës Praktiken hëllefen Iech Kräizkontaminatioun ze vermeiden.DNA Fangerofdrock, Karyotyping an Isotyping kënne bestätegen ob et Kräizkontaminatioun an Ärer Zellkultur ass.
Och wann net sou heefeg wéi mikrobieller Kontaminatioun, extensiv Kräizkontaminatioun vu ville Zelllinnen mat HeLa an aner séier wuessend Zelllinnen ass e kloer definéierte Problem mat eeschte Konsequenzen.Kritt Zelllinne vu renomméierten Zellbanken, kontrolléiert regelméisseg d'Charakteristike vun den Zelllinnen a benotzt gutt aseptesch Techniken.Dës Praktiken hëllefen Iech Kräizkontaminatioun ze vermeiden.DNA Fangerofdrock, Karyotyping an Isotyping kënne bestätegen ob et Kräizkontaminatioun an Ärer Zellkultur ass.
Post Zäit: Feb-01-2023