Ee vun den Haaptvirdeeler vun der Zellkultur ass d'Fäegkeet fir déi kierperlech Chimie vun der Zellreproduktioun ze manipuléieren (dh Temperatur, pH, osmoteschen Drock, O2 an CO2 Spannung) an physiologescht Ëmfeld (dh Hormon- an Nährstoffkonzentratioun).Zousätzlech zu der Temperatur gëtt d'Kulturëmfeld vum Wuesstumsmedium kontrolléiert.
Och wann d'physiologescht Ëmfeld vun der Kultur net sou kloer ass wéi seng kierperlech a chemesch Ëmwelt, e bessert Verständnis vu Serumkomponenten, Identifikatioun vu Wuesstumsfaktoren, déi fir d'Verbreedung erfuerderlech sinn, an e bessert Verständnis vun der Mikroëmfeld vun Zellen an der Kultur.(Also Zell-Zell Interaktioun, Gas Diffusioun, Interaktioun mat der Matrixentgasung) erlaabt elo bestëmmte Zell Linnen an serum-gratis Medien cultured gin.
1.Kulturëmfeld beaflosst Zellwachstum
Notéiert w.e.g. datt d'Zellkulturbedéngungen fir all Zelltyp anescht sinn.
D'Konsequenze vun der Ofwäichung vun de Kulturbedéngungen, déi fir eng bestëmmten Zelltyp erfuerderlech sinn, reichen vum Ausdrock vun anormalen Phänotypen bis zum kompletten Ausfall vun der Zellkultur.Dofir empfeelen mir Iech mat der Zelllinn vertraut ze ginn, an där Dir interesséiert sidd a strikt d'Instruktioune befollegt fir all Produkt deen Dir an Ärem Experiment benotzt.
2.Precautiounen fir en optimiséiert Zellkulturëmfeld fir Är Zellen ze kreéieren:
Kulturmedien a Serum (kuckt hei ënnen fir méi Informatioun)
pH an CO2 Niveauen (kuckt hei ënnen fir méi Informatioun)
Kultivéiert Plastik (kuckt hei ënnen fir méi Informatioun)
Temperatur (kuckt hei ënnen fir méi Informatioun)
2.1 Kulturell Medien a Serum
D'Kulturmedium ass de wichtegsten Deel vun der Kulturëmfeld, well et d'Nährstoffer, d'Wuesstemsfaktoren an d'Hormone ubitt, déi fir Zellwachstum néideg sinn, a reguléiert den pH an den osmoteschen Drock vun der Kultur.
Och wann déi initial Zellkulturexperimenter mat natierleche Medien ausgefouert goufen, déi aus Tissueextrakter a Kierperflëssegkeete kritt goufen, huet de Bedierfnes fir Standardiséierung, Mediequalitéit a verstäerkte Nofro zur Entwécklung vun definitive Medien gefouert.Déi dräi Basis Zorte vu Medien sinn Basal Medien, reduzéiert Serum Medien a serum-gratis Medien, a si hunn verschidden Ufuerderunge fir Serum Ergänzung.
2.1.1 Basis mëttelfristeg
Gibco Zellkulturmedium
Déi meescht Zelllinne wuessen gutt a Basismedien mat Aminosäuren, Vitaminnen, anorganesche Salzer a Kuelestoffquellen (wéi Glukos), awer dës Basismedieformuléierunge musse mat Serum ergänzt ginn.
2.1.2 Reduzéiert Serum Medium
Fläsch mat Gibco Low Serum Medium
Eng aner Strategie fir déi negativ Auswierkunge vum Serum an Zellkulturexperimenter ze reduzéieren ass serum-reduzéiert Medien ze benotzen.Reduzéiert Serum Medium ass eng Basis Medium Formel reich an Nährstoffer an Déier ofgeleet Faktoren, déi d'Quantitéit u Serum erfuerderlech reduzéieren.
2.1.3 Serum-gratis Medium
Fläsch mat Gibco serumfräi Medium
Serum-gratis Medium (SFM) ëmkreest d'Benotzung vun Déiere Serum andeems Serum duerch entspriechend Ernärung an Hormonformuléierungen ersat gëtt.Vill primär Kulturen an Zelllinnen hunn serumfräi Medium Formuléierungen, dorënner d'Chinesen Hamster Ovary (CHO) rekombinant Protein Produktiounslinn, verschidde Hybridoma Zelllinnen, Insektlinnen Sf9 a Sf21 (Spodoptera frugiperda), souwéi fir De Host fir Virusproduktioun. (zum Beispill, 293, VERO, MDCK, MDBK), etc.. Ee vun den Haaptvirdeeler vun engem serum-gratis Medium ze benotzen ass d'Fähigkeit, de Medium selektiv fir spezifesch Zellarten ze maachen andeems Dir eng entspriechend Kombinatioun vu Wuesstumsfaktoren auswielen.Déi folgend Tabell lëscht d'Virdeeler an Nodeeler vu serumfräie Medien.
Virdeel
Erhéijung Kloerheet
Méi konsequent Leeschtung
Méi einfach Reinigung an downstream Veraarbechtung
Genau beurteelen Zellfunktioun
Erhéijung Produktivitéit
Besser Kontroll vu physiologeschen Reaktiounen
Erweidert Zell Medien Detektioun
Nodeel
Zell Typ spezifesch Medium Formel Ufuerderunge
Braucht méi héich Reagensreinegkeet
Verlängerung am Wuesstem
2.2.1 pH Niveau
Déi meescht normal Mamendéierenzelllinne wuessen gutt bei pH 7,4, an d'Ënnerscheeder tëscht verschiddene Zelllinne si kleng.Wéi och ëmmer, e puer transforméiert Zelllinnen hu gewisen datt se besser an engem liicht sauer Ëmfeld wuessen (pH 7.0 - 7.4), während e puer normal Fibroblastzellen e liicht alkalescht Ëmfeld léiwer (pH 7.4 - 7.7).Insektzelllinne wéi Sf9 a Sf21 wuessen am beschten bei pH 6,2.
2.2.2 CO2 Niveau
De Wuesstumsmedium kontrolléiert den pH vun der Kultur a puffer d'Zellen an der Kultur fir Ännerungen am pH ze widderstoen.Normalerweis gëtt dës Pufferung erreecht andeems se organesch (zum Beispill HEPES) oder CO2-Bikarbonat-baséiert Puffer enthalen.Well de pH vum Medium hänkt vun der delikater Gläichgewiicht vun opgeléistem Kuelendioxid (CO2) a Bikarbonat (HCO3-) of, änneren Ännerungen am atmosphäresche CO2 den pH vum Medium.Dofir, wann Dir e Medium benotzt, gebuffert mat engem CO2-Bikarbonat-baséiert Puffer, ass et néideg exogen CO2 ze benotzen, besonnesch wann Dir Zellen an oppe Kultur Platen kultivéiert oder transforméiert Zelllinnen bei héije Konzentratioune kultivéiert.Obwuel déi meescht Fuerscher normalerweis 5-7% CO2 an der Loft benotzen, benotzen déi meescht Zellkulturexperimenter normalerweis 4-10% CO2.Wéi och ëmmer, all Medium huet eng recommandéiert CO2 Spannung a Bikarbonat Konzentratioun fir de korrekten pH an den osmoteschen Drock z'erreechen;fir méi Informatiounen, kuckt w.e.g. op d'Instruktioune vum mëttelhersteller.
2.3 Kultivatioun vu Plastik
Zellkulturplastik sinn a verschiddene Formen, Gréissten a Flächen verfügbar fir verschidden Zellkulturapplikatiounen ze passen.Benotzt den Zellkultur Plastik Uewerfläch Guide an Zell Kultur Container Guide hei ënnen fir Iech ze hëllefen de richtege Plastik fir Är Zellkulturapplikatioun ze wielen.
Kuckt all Thermo Scientific Nunc Zellkulturplastik (Werbelink)
2.4 Temperatur
Déi optimal Temperatur fir Zellkultur hänkt zu engem groussen Deel vun der Kierpertemperatur vum Host of, aus deem d'Zellen isoléiert sinn, an a mannerem Mooss vun den anatomesche Verännerungen an der Temperatur (zum Beispill kann d'Hauttemperatur méi niddereg sinn wéi déi vum Skelettmuskel. ).Fir Zellkultur ass Iwwerhëtzung e méi eeschte Problem wéi Iwwerhëtzung.Dofir ass d'Temperatur am Inkubator normalerweis liicht ënner der optimaler Temperatur gesat.
2.4.1 Optimal Temperatur fir verschidde Zelllinnen
Déi meescht mënschlech a Mamendéieren Zelllinne gi bei 36 ° C bis 37 ° C fir optimal Wuesstum gehal.
Insektenzellen ginn op 27 ° C kultivéiert fir optimal Wuesstum;si wuessen méi lues bei méi niddregen Temperaturen an Temperaturen tëscht 27°C an 30°C.Iwwer 30 ° C fällt d'Vitalitéit vun Insektenzellen erof, och wann et op 27 ° C zréckgeet, ginn d'Zellen net erholen.
Avian Zell Linnen brauchen 38,5 ° C fir maximal Wuesstem z'erreechen.Obwuel dës Zellen op 37 ° C gehale kënne ginn, wäerte se méi lues wuessen.
Zelllinnen, déi vu kalbluddege Déieren ofgeleet ginn (wéi Amphibien, Kaltwasserfësch) kënnen e breet Temperaturberäich vu 15°C bis 26°C toleréieren.
Post Zäit: Feb-01-2023